require 'set'
File.readlines("ファイル名").to_set.map { |item| puts item }

Ruby の集合を使うと、以下のような行区切りのファイルを、

あ
い
あ
あ
う
い

以下のような結果にできる。
ただし、集合にはデフォルトで、順番は無いので、
順番が必要なら、お好みの基準でソートする

あ
い
う